Метод хроматографии в тонком слое сорбента применили в фармацевтическом анализе для разделения экстрактов и насто­ек лекарственных растений советские ученые Н. А. Измайлов и М. С. Шрайдер (1938).

Метод ТСХ дает возможность разделять смеси лекарствен­ных веществ, идентифицировать их, устанавливать чистоту и осуществлять количественное определение компонентов.

ТСХ имеет то преимущество, что позволяет разделять слож­ные лекарственные смеси на отдельные компоненты, близкие по химической структуре и свойствам, например смеси аминокис­лот, алкалоидов, барбитуратов, сульфаниламидов и др.

Особенно удобен этот метод для анализа малых количеств ядовитых и сильнодействующих веществ в прописи, когда опре­деление их химическими методами затруднено. Этот метод при­меняется и для обнаружения примесей в веществе, что особен­но важно в промышленном производстве постадийного контро­ля качества промежуточных продуктов синтеза.

К преимуществам этого метода относится и то, что он не требует сложного оборудования и поэтому доступен при раз­личных исследованиях в любых условиях.

Метод ТХС осуществляется в двух модификациях - с за­крепленным и незакрепленным слоем сорбента. При этом нахо­дят применение более двадцати различных сорбентов, из них чаще используют оксид алюминия, различные марки силикаге-ля, целлюлозу, полиамидный порошок, синтетические смолы и другие сорбенты.

В последние годы стали широко применяться готовые пла­стинки «Силуфол» с закрепленным слоем сорбента (производ­ство ЧССР).

Процесс хроматографирования сводится к следующему. На стеклянную пластинку (размером 6x9 см; 12x16 см или др.) с закрепленным или незакрепленным слоем сорбента или на пластинку «Силуфол» на линию старта наносят при помощи ка­пилляра раствор исследуемого вещества или смеси веществ и пластинку под углом помещают в специальную камеру (четы­рехугольная стеклянная банка с притертой крышкой) со смесью

соответствующих раствори­телей (система). Эти рас­творители вследствие капил­лярности слоя сорбента пе­ремещаются по пластинке, увлекая нанесенные на ли­нию старта вещества из сме­си на различные расстояния.

После прохождения рас­творителя на заданную вы­соту пластинку вынимают из камеры, подсушивают и проявляют с помощью соот­ветствующих химических ре­активов.

Вещества на хромато-грамме можно обнаружить и по флюоресценции в УФ-

свете    (применяют   ультрафиолетовые   лампы   различных си­стем).

Положение пятен веществ по окончании хроматографирова-ния характеризуется значением Rf - Ratio of Fronts (от англ. Rate - соотношение и Fronts - фронт).

где: АС - расстояние от линии старта до центра пятна вещест­ва, АВ - расстояние, пройденное фронтом растворителя от ли­нии старта (рис. 8).

Значение Rf для каждого вещества вполне определенно и является характерной величиной; по значению Rf идентифици­руются вещества смеси.

Поскольку значение Rf в значительной степени зависит от качества сорбентов, чистоты растворителей, температуры, насы­щенности камер и других факторов, для большей достоверно­сти результата анализа применяют «свидетели» - стандартные растворы аналогичных веществ смеси, которые наносят на ли­нию старта пластинки параллельно с пробой анализируемой смеси веществ. При одинаковом значении Rf исследуемых ве­ществ смеси и «свидетелей» идентификация считается положи­тельной. Для количественной оценки того или другого компо­нента смеси поступают двояко: окрашенную зону вещества осторожно удаляют с пластинки, затем определяемое вещество элюируют с сорбента соответствующими растворителями. Опре­деление вещества в элюате проводят спектрофотометрически или фотометрически.

Можно количественное содержание компонентов смеси опре­делять непосредственно на хроматограммах.

В этом случае используют два способа: 1) визуально сравни­вают интенсивности окраски пятен веществ исследуемой смеси с аналогичными пятнами «свидетелей»; при этом площади пятен измеряют планиметрически или вычисляют по радиусам зон веществ, используя формулу:

S=ni?-i?₁,

где S-площадь пятна, мм²; R и Ri - наибольший и наимень­ший радиусы зон, мм; я=3,14;

2) измеряют интенсивность окраски пятен денситометриче-ски или спектрофотометрически непосредственно на хромато-грамме, пользуясь денситометрами, спектрофотометрами специ­ального устройства.